發(fā)光免疫分析是一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、檢測(cè)快速及無放射危害的分析技術(shù)。70年代末以來得到了迅速發(fā)展，目前在國際上已經(jīng)實(shí)現(xiàn)商品化和產(chǎn)業(yè)化的發(fā)光免疫分析產(chǎn)品，基本上可以分為：化學(xué)發(fā)光、時(shí)間分辨熒光(也稱時(shí)間延遲光致發(fā)光)、電化學(xué)發(fā)光(也稱場(chǎng)致發(fā)光和電致發(fā)光)幾種。下面生化清洗液小編就為您帶來介紹。
1、化學(xué)發(fā)光
化學(xué)發(fā)光是指在化學(xué)反應(yīng)過程中發(fā)出可見光的現(xiàn)象。通常是指有些化合物不經(jīng)紫外光或可見光照射，通過吸收化學(xué)能(主要為氧化還原反應(yīng))，從基態(tài)激發(fā)至激發(fā)態(tài)。退激時(shí)通過躍遷(或?qū)⒓ぐl(fā)能轉(zhuǎn)移至受體分子上)，釋放能量產(chǎn)生光子，以光形式放出能量從而導(dǎo)致的發(fā)光現(xiàn)象。其主要特點(diǎn)為消耗發(fā)光劑。同時(shí)量子效率相對(duì)較低。
1.1 按化學(xué)反應(yīng)類型分類：可分為酶促化學(xué)發(fā)光和非酶促化學(xué)發(fā)光兩類。其中酶促化學(xué)發(fā)光主要包括辣根過氧化物酶(HRP)系統(tǒng)、堿性磷酸酶 (ALP)系統(tǒng)、黃嘌呤氧化酶系統(tǒng)等。酶促發(fā)光的共同特點(diǎn)為發(fā)光過程中作為標(biāo)記物的酶基本不被消耗，而反應(yīng)體系中發(fā)光劑充分過最，因此發(fā)光信號(hào)強(qiáng)而穩(wěn)定，且發(fā)光時(shí)間較長(zhǎng)。因此可采用速率法測(cè)量，故檢測(cè)方式簡(jiǎn)單、成本較低。酶促反應(yīng)的主要缺點(diǎn)為工作曲線可能隨時(shí)間漂移，而且低端斜率容易呈非線性下移。而非酶促化學(xué)發(fā)光包括吖啶酯系統(tǒng)、草酸酯系統(tǒng)、三價(jià)鐵一魯米諾系統(tǒng)等。非酶促發(fā)光的共同特點(diǎn)為發(fā)光過程中標(biāo)記物被消耗，同時(shí)作為標(biāo)記物的發(fā)光劑是發(fā)光反應(yīng)的瓶頸，即含量總是相對(duì)不足，因此發(fā)光信號(hào)持續(xù)時(shí)間較短；如果直接在免疫反應(yīng)杯中啟動(dòng)發(fā)光反應(yīng)，由于發(fā)光劑被很快消耗，故只能進(jìn)行一次性測(cè)量。所以重復(fù)性較差。為降低檢測(cè)成本并實(shí)現(xiàn)重復(fù)測(cè)量，目前普遍采用原位進(jìn)樣加流動(dòng)池的時(shí)間積分測(cè)量方式。因此儀器成本及維護(hù)費(fèi)用較高，而且反復(fù)使用的流動(dòng)池可能導(dǎo)致交叉污染；并目沖洗或進(jìn)樣中產(chǎn)生的氣泡也會(huì)干擾測(cè)定；同時(shí)繁瑣冗長(zhǎng)的沖洗過程也會(huì)成為提高檢測(cè)效率的瓶頸。另外，使用磁性或非磁性微粒時(shí)，強(qiáng)烈的散射吸收作用也會(huì)降低靈敏度。
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